相信開(kāi)展過(guò)維生素檢測的小伙伴們，已經(jīng)體驗到了微生物法檢測維生素的“難”了。試驗中總是出現諸多問(wèn)題——活化菌株不成功，標準曲線(xiàn)異常，檢測結果回收率偏高或者偏低，重復性差等。為何此種方法如此難做，國標還將葉酸、B12、生物素、泛酸的微生物檢測方法作為首選方法和仲裁方法呢?
微生物法根據菌株必須依賴(lài)特定維生素才能生長(cháng)的原理，利用比濁法測定細菌繁殖程度或代謝產(chǎn)物，間接對該維生素進(jìn)行定量測定。該方法特異性強，靈敏度高，也是國際上廣泛使用的方法。微生物法檢測的是具有生物活性可以被吸收利用的維生素總量，這是儀器分析方法很難做到的。
“難”在哪里呢？是否有解決辦法呢？
“難”點(diǎn)一：菌株活化、保存、定期轉種以及接種液制備
鼠李糖乳桿菌ATCC7469、植物乳桿菌ATCC8014、萊士曼氏乳桿菌ATCC7830，這三株菌中當屬萊士曼氏乳桿菌最為嬌貴，常有活化失敗的案例發(fā)生。建議大家購買(mǎi)此菌后，第一次活化時(shí)需嚴格按照ATCC說(shuō)明書(shū)上方法先接種于MRS肉湯中35℃，有氧培養48h，之后轉種血平板于35℃，厭氧培養48h，方可活化成功。此外，每次做微生物法檢測維生素試驗前，需提前用一周時(shí)間來(lái)活化儲備菌種，連續傳種2代～3代恢復細菌活力后，方可使用。接種液的制備因項目不同而處理方法不同，筆者不再贅述，只強調一點(diǎn)：方法中只給出大致菌液濃度范圍即“透光率60%～80%之間”，具體調成多少濃度，還需實(shí)驗者根據菌株狀態(tài)和試驗經(jīng)驗進(jìn)行制備。
應對“難”點(diǎn)一的解決方案——使用凍干的定量菌球
此產(chǎn)品真空包裝，菌濃度定量制備且符合國標要求，直接加入培養基中即可使用，既可保證菌株活性又可免去活菌、洗菌、調菌濃度等繁瑣操作，方便、簡(jiǎn)單、準確！同時(shí)，我司還提供了標準菌株的來(lái)源說(shuō)明，可存檔溯源。
目前標準中，要求標準品的純度需要≥99%。通常購買(mǎi)到的標準品純度都不夠，因此需要折算后進(jìn)行稱(chēng)量，具體算法為：
稱(chēng)量后按照國標要求逐步稀釋?zhuān)来闻渲茦藴蕛湟?、中間液和工作液。配制時(shí)，需要注意——以下幾點(diǎn)：
標準品精確稱(chēng)量，應使用足夠精度的天平進(jìn)行標準品的稱(chēng)量；
不同維生素種類(lèi)使用不同的溶解液，溶解需充分搖勻，每次定容都需十分精準；
使用棕色容量瓶進(jìn)行標準溶液的配制，應注意不同維生素種類(lèi)的標準儲備液、中間液和工作液的保存條件及效期；
國標規定配制使用的水為二級水，所用的試劑比如NaOH、乙醇等為分析純或者更高級別。
標準溶液的配制過(guò)程復雜、步驟較多、對操作人員的技術(shù)水平要求比較高，配制的準確與否會(huì )直接影響檢測結果的準確性，導致回收率偏高或者偏低的情況發(fā)生。
應對“難”點(diǎn)二的解決方案——使用凍干的定量標準品
我司推出凍干定量標準品，只需使用無(wú)菌水復溶，充分震蕩混勻，即可使用。一“鍵”操作即可免去大家進(jìn)行標準品稱(chēng)量、配制、稀釋、保存等復雜的工作。同時(shí)我司還提供了標準品來(lái)源說(shuō)明，可溯源，請放心使用。
制備維生素測定培養基，三角瓶需專(zhuān)用，不可與配制其他培養基的三角瓶混用，否則易混入目標維生素的成分；
培養基配制用水，必須使用GB/T6682規定的二級水；
維生素測定培養基中，含有很多不耐熱、易變性成分，高壓滅菌時(shí)需注意不可過(guò)度加熱。此外，滅菌后應及時(shí)將測定系列管從高壓鍋中拿出，放入冷水中快速降溫；
操作繁瑣，耗時(shí)。需先將培養基分裝系列測試管，滅菌，再接種菌液，此操作過(guò)程繁瑣易污染，稍有不慎就會(huì )導致試驗失敗。
應對“難”點(diǎn)三的解決方案——使用即用型培養基
即用型培養基，已滅菌處理，加入菌球混勻后，直接分裝到系列試驗管中，只需“一步”即可完成接種操作，替代國標中培養基滅菌和接種菌液的“兩步”工作，解決上述“難”點(diǎn)的同時(shí)，大大節約時(shí)間，提高工作效率。
“難”點(diǎn)四——容量瓶，試管，槍頭等試驗材料潔凈度
維生素檢測過(guò)程所涉及的所有器皿，包括容量瓶，吸管，三角瓶，試管，試管塞等均需處理，方可使用。此外，建議每個(gè)項目器皿專(zhuān)用，不要混用，避免干擾。
應對“難”點(diǎn)四的解決方案——使用無(wú)菌試管
維生素即用型產(chǎn)品，配套使用無(wú)菌試管，避免試管，試管塞清洗，酸泡，熱處理的麻煩，極大程度的去除維生素檢測的干擾因素，提高工作效率的同時(shí)，保證結果的準確性。
維生素即用型產(chǎn)品——可有效解決國標法檢測試驗過(guò)程中的所有“難”點(diǎn)！減少人員操作誤差，提升試驗結果的準確性，并可極大程度的提高檢測效率！
