葡萄球菌屬是革蘭氏陽(yáng)性球菌，因鏡檢時(shí)呈單個(gè)、成對、四聯(lián)或不規則的簇群，如串狀葡萄，故稱(chēng)為葡萄球菌。葡萄球菌無(wú)鞭毛，不能運動(dòng)。無(wú)芽胞，需氧或兼性厭氧，對營(yíng)養要求不高。
致病性的葡萄球菌多數能產(chǎn)生血漿凝固酶，而非致病性菌株一般不產(chǎn)生，因此，血漿凝固酶試驗是鑒別葡萄球菌有無(wú)致病性的重要指標之一。
致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：
一種是結合凝固酶，存在于菌體細胞壁上，可直接作用于血漿中纖維蛋白原，使其凝集成塊，并附著(zhù)于細菌表面，玻片法和試管法均可; 另一種稱(chēng)為游離凝固酶，是在菌體內生成后分泌至菌體外，被血漿中協(xié)同因子激活，形成葡萄球菌凝固酶類(lèi)物質(zhì)，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，導致血漿凝固，適用于試管法。
為方便理解，請看下表：
玻片法血漿凝固酶試驗應用已久，醫院臨床實(shí)驗室多采用此方法，此方法優(yōu)點(diǎn)：快速、簡(jiǎn)單、易于操作。缺點(diǎn)：出現假陽(yáng)性，對血漿的濃度，敏感性，特異性要求較高。而試管法的優(yōu)點(diǎn)：結果穩定，可檢測游離型凝固酶和結合型凝固酶?！禛B 4789-2016食品安全國家標準?食品微生物學(xué)檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》中也采用了試管法。
血漿凝固酶試驗所需的試劑藥品與菌株
1、實(shí)驗藥品：凍干血漿（CM304）、BHI肉湯（GCM917B/CM917B）、營(yíng)養瓊脂（GCM107/CM107）、無(wú)菌水。
2、血漿凝固酶對照菌株：陽(yáng)性菌株：金黃色葡萄球菌 ??陰性菌株：表皮葡萄球菌。
血漿凝固酶試驗操作流程中的注意事項
1、 將在Baird-Parker平板上或血平板上的可疑菌落同時(shí)接種在5ml的BHI肉湯與營(yíng)養瓊脂，36℃±1℃，培養18-24h。?
培養完成后，先觀(guān)察BHI肉湯培養物的生長(cháng)狀態(tài)。如果出現生長(cháng)狀態(tài)不良，菌液濁度不夠，需要用營(yíng)養瓊脂上的菌落重新接種BHI肉湯活化。
2、吸取0.5ml無(wú)菌水到CM304凍干血漿西林瓶中，搖勻使之溶解均勻，再加入上述新鮮BHI培養物0.2-0.3ml，混合均勻后放置36±1℃培養。?
加入新鮮的BHI培養物，“新鮮”應理解為，培養物從培養箱取出后，立即進(jìn)行試驗。以保證培養物的酶活力良好。避免出現因取出一段時(shí)間后，因酶活力降低而引起的假陰性；加入培養物后要輕輕轉動(dòng)瓶身至混合均勻，不要采取劇烈搖晃的方式。
3、每間隔0.5h觀(guān)察一次結果，直至6h結束，若出現凝固（凝固體積大于原體積一半）即待測菌血漿凝固酶為陽(yáng)性，否則為陰性 。
試驗應每半小時(shí)觀(guān)察一次，不可直接觀(guān)察第6h后的結果。一些金葡菌能夠產(chǎn)生蛋白酶來(lái)分解纖維蛋白，而出現先凝集而后消融的情況，保證每半小時(shí)觀(guān)察一次，防止因觀(guān)察不及時(shí)，而誤判成假陰性。觀(guān)察凝固情況時(shí)，采用將西林瓶緩慢傾斜或倒置的方式。不要采用搖晃的方式進(jìn)行觀(guān)察?。?！當凝固體積大于原體積一半，判為陽(yáng)性。
結果判定常見(jiàn)情況分析
當遇到凝集現象不明顯，對結果的判定產(chǎn)生疑問(wèn)時(shí)，可參照阿加西老師的《有關(guān)金葡菌不得不說(shuō)的事》里提到的方法，進(jìn)行操作。先對試管的凝集程度進(jìn)行評分。再進(jìn)行判定。3+以上者判為陽(yáng)性，1+、2+者，可將培養物重新培養后，再做一次血漿凝固酶實(shí)驗?；虿捎闷渌椒▽梢删赀M(jìn)行鑒定。
參考文獻
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