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    沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定要點(diǎn)解析

    發(fā)布時(shí)間: 2020-11-26

    全球每年由沙門(mén)氏菌引起的胃腸炎病例約有九千多萬(wàn)例,導致約20萬(wàn)人死亡,其中85%病例是食源性的,常居食物中毒榜首。因此,腸桿菌科的沙門(mén)氏菌是一類(lèi)重要的、全球性的人畜共患的食源性致病菌,其檢測在畜禽健康、人類(lèi)公共安全食品安全等方面意義重大。


    隨著(zhù)技術(shù)的進(jìn)步,沙門(mén)氏菌鑒定雖然有多種新鑒定手段,如免疫學(xué)、分子生物學(xué)、基于細胞物理/化學(xué)特征的檢測技術(shù)、生物傳感器等檢測技術(shù),但目前限制最少、應用最廣泛的還是傳統的檢測技術(shù),以形態(tài)學(xué)觀(guān)察、培養特征、生理生化特征、抗原特征的鑒別為主。


    傳統檢測技術(shù)條件簡(jiǎn)單、技術(shù)成熟、假陽(yáng)性率低,但存在檢測時(shí)間長(cháng),準確度受操作人經(jīng)驗判斷和菌活性影響等缺點(diǎn),而沙門(mén)氏菌屬包含2個(gè)種,含6個(gè)亞種,2579個(gè)血清型,具有多種生化組合特征,其生理生化特征鑒定受人員經(jīng)驗判斷和菌活性影響最大,這也是沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定的一大難點(diǎn)。


    下面我們就沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定流程、商品化試劑盒的使用,沙門(mén)菌及常見(jiàn)干擾菌生化鑒定現象,常見(jiàn)問(wèn)題來(lái)為您解析這一操作步驟。


    01?? 沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定 流程


    為幫助大家理順流程,我們依據GB4789.4-2016標準,將沙門(mén)氏菌屬的生化鑒定判定步驟簡(jiǎn)化如下圖:


    流程??


    沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定要點(diǎn)解析


    其中,必須用到的生化試劑有五種:

    三糖鐵瓊脂、賴(lài)氨酸脫羧酶、靛基質(zhì)、尿素、氰化鉀。


    可能用到的生化試劑有三種:

    甘露醇、山梨醇、ONPG

    ?測試中分離的可疑單菌落經(jīng)純化后,每個(gè)菌株測試一組,以確認該菌是否為沙門(mén)氏菌屬。


    02? 沙門(mén)氏菌傳統生化鑒定商品化試劑盒 操作


    為更方便、快速地完成沙門(mén)氏菌屬的系列生化鑒定并判定,我們可以選購商品化套裝生化試劑盒。


    下面,我們以陸橋DBI-05沙門(mén)氏菌干制生化鑒定試劑盒操作視頻為大家演示:

    https://v.qq.com/x/page/m3202nftgzu.html


    視頻指路牌

    沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定要點(diǎn)解析


    經(jīng)過(guò)培養、滴加附加試劑后,按下表判斷各項生化試劑結果:


    沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定要點(diǎn)解析


    然后,參照01沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定流程部分,判斷該菌是否為沙門(mén)氏菌。


    03? 沙門(mén)氏菌及常見(jiàn)干擾菌生化鑒定 結果


    典型(完全符合A1組合結果)的沙門(mén)氏菌生化結果為:


    沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定要點(diǎn)解析


    其他常見(jiàn)沙門(mén)及干擾菌生化結果見(jiàn)下表:


    沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定要點(diǎn)解析


    沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定要點(diǎn)解析


    04? 沙門(mén)氏菌傳統生化鑒定 常見(jiàn)問(wèn)題


    在沙門(mén)氏菌傳統生化鑒定過(guò)程中,我們還可能會(huì )遇到以下常見(jiàn)問(wèn)題:

    Q1:在三糖鐵實(shí)驗中,菌株產(chǎn)硫化氫變黑覆蓋了斜面底層的顏色,該如何判定底層產(chǎn)酸還是產(chǎn)堿?

    A1:測試菌株產(chǎn)硫化氫,可判定底層產(chǎn)酸變黃。

    為更好地觀(guān)察判定,可①減少接種量(先斜面劃線(xiàn),再留少量菌進(jìn)行穿刺,注意不要穿刺到底部);縮短培養時(shí)間(8h-18h)。

    此外,還需要注意封膜保濕,防止斜面干縮導致結果誤判。


    沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定要點(diǎn)解析

    Q2:生化鑒定使用的菌懸液濁度要求多少?

    A2:生化鑒定套裝為微量鑒定系統,對于菌懸液濃度有要求,使用0.5麥氏濁度進(jìn)行接種,菌懸液濃度過(guò)大或者過(guò)小對實(shí)驗結果的準確度有影響。


    Q3:尿素酶變淺橙色,如何判定是陰性還是陽(yáng)性?

    A3:尿素酶黃色或橙色均判定為陰性,只有玫紅色或紅色才判定為陽(yáng)性。


    沙門(mén)氏菌屬傳統生化鑒定要點(diǎn)解析


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    最后,為您附上此次出鏡的生化鑒定盒介紹。



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    參考文獻


    [1]? Majowicz, Shannon E., et al.The global burden of nontyphoidal Salmonella gastroenteritis.

    Clinical infectious diseases 50.6 (2010): 882-889.

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    [4]? GB4789.4-2016 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 沙門(mén)氏菌檢驗[S].

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