GB 15979《一次性使用衛生用品衛生標準》發(fā)布于1996年，最新一版更新于2002年，隨著(zhù)今年新型冠狀病毒疫情的侵襲，這個(gè)標準廣受關(guān)注，而標準里對于綠膿桿菌的檢測是很多檢驗人員關(guān)注和有所疑惑的。在這里，小王就這個(gè)標準里對綠膿桿菌檢測的相關(guān)要點(diǎn)和大家分享一下。

一、綠膿桿菌簡(jiǎn)介

首先，我們先了解下綠膿桿菌。

綠膿桿菌，又稱(chēng)銅綠假單胞菌(pseudomonas aeruginosa)，1882年由Gersard從傷口膿液中分離，是一種革蘭氏陰性、好氧、呈長(cháng)棒形的細菌，因感染后膿汁和浸出液等病料呈綠色，故此得名。

該菌最適宜的生長(cháng)溫度為30℃-37℃，42℃能生長(cháng)，4℃不生長(cháng)。大多數菌株能產(chǎn)生水溶性的綠膿菌素和熒光色素，可向培養基周?chē)鷶U散而呈現藍綠色，某些菌株也分泌一些暗紅色素（具體可參考GB 8538-2016中對于銅綠假單胞菌可疑菌落鑒定的相關(guān)內容）。?

綠膿桿菌的革蘭氏染色鏡檢照片

二、綠膿桿菌檢驗流程

接下來(lái)，我們來(lái)看一下GB 15979《一次性使用衛生用品衛生標準》中關(guān)于綠膿桿菌的檢驗流程：

第一步中，5mL樣液加入到50mL SCDLP培養液中，35℃±2℃培養18h-24h。由于綠膿桿菌是需氧菌，所以在培養液表面生長(cháng)旺盛，會(huì )形成一層薄菌膜，培養液呈黃綠色或藍綠色。這點(diǎn)是很容易做到和看到的。

但第二步中，標準中描述：

其實(shí)，“挑取菌膜處的培養物劃線(xiàn)接種十六烷三甲基溴化銨瓊脂，培養后觀(guān)察其菌落周?chē)囵B基略帶粉紅色”這一現象，很多檢驗人員都反饋看不到所謂的粉紅色。小王用樣品中分離的綠膿桿菌劃線(xiàn)了十六烷三甲基溴化銨瓊脂，平板現象如下：

從圖中可以看出，十六烷三甲基溴化銨瓊脂上的菌落周?chē)鷽](méi)有出現粉紅色，鑒于GB 8538-2016飲用天然礦泉水檢測方法中對綠膿桿菌菌落形態(tài)的描述有藍綠色、紅褐色等多種顏色，小王認為，即便劃線(xiàn)后培養基沒(méi)有所謂的粉紅色，也依然要繼續進(jìn)行后續的生化鑒定。因為多數研究表明，綠膿桿菌所產(chǎn)色素的顏色和培養基的成分相關(guān)。

三、綠膿菌素生化實(shí)驗

在后續的生化鑒定實(shí)驗中，小王認為操作上存在難度的，就是綠膿菌素實(shí)驗了。那咱們就先看下標準中是如何對此實(shí)驗進(jìn)行描述的：

從標準中可以看出，加三氯甲烷后的操作只有充分振蕩，而實(shí)際操作中，直接振蕩的效果很差，即便是用接種環(huán)把上面的菌苔刮取后振蕩，效果也依舊不佳。請看下圖：

所以，各位小伙伴們在做此實(shí)驗時(shí)候，就可以借鑒小王的操作啦！

至于其他生化實(shí)驗，小王還是相信各位水平的，如果依然有不太明白的，那就聯(lián)系陸橋技術(shù)小王！隨時(shí)恭候您的提問(wèn)。

參考文獻

1.韓青松, 簡(jiǎn)永利, 涂宜強,等. 綠膿桿菌研究進(jìn)展[J]. 畜牧與飼料科學(xué), 2012(01):128-130.

2.GB 15979-2002?一次性使用衛生用品衛生標準[S].

3.GB 8538-2016?食品安全國家標準?飲用天然礦泉水檢驗方法[S].