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    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?

    發(fā)布時(shí)間: 2023-06-26

    最近,檢測圈的一個(gè)傳聞引起檢測大神們的瘋狂討論—沙門(mén)氏菌在VRBA內的菌落是紅色的!從原理上來(lái)說(shuō),這是不可能的!從傳聞來(lái)看,又像是真實(shí)存在的!為了破解這個(gè)謎題,我們做了相關(guān)的驗證試驗。

    首先我們要了解一下VRBA培養基的成分及沙門(mén)氏菌的生化特性。




    VRBA及沙門(mén)氏菌生化原理剖析




    先來(lái)看VRBA培養基的組成成分(圖1)及原理:


    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?

    圖1? VRBA的組成成分


    VRBA培養基中含有乳糖和中性紅。大腸菌群可發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸,引起pH值的變化,中性紅作為酸堿指示劑使菌落變紅;酸與膽鹽結合形成膽酸鹽沉淀,故菌落周?chē)鷷?huì )有紅色的膽酸鹽沉淀環(huán)。

    所以大腸菌群菌落變紅是由于發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸導致的!

    了解了菌落變紅的原理,我們再來(lái)看一下沙門(mén)氏菌的生化特性:

    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?

    圖2? 三糖鐵試驗結果


    從三糖鐵的試驗結果(圖2)看,沙門(mén)氏菌不能利用乳糖,只能利用葡萄糖,而VRBA 的成分中并沒(méi)有葡萄糖!從原理上分析,沙門(mén)氏菌在VRBA上不會(huì )形成紅色菌落。所以傳聞會(huì )是真的么?



    試驗驗證




    ?首先,我們采用涂布法,在VRBA表面接種沙門(mén)氏菌。結果發(fā)現,沙門(mén)氏菌在VRBA表面呈現大的無(wú)色菌落(圖3)。這符合沙門(mén)氏菌的特征,沙門(mén)氏菌一般不發(fā)酵乳糖,但在有氧條件下分解蛋白胨產(chǎn)堿,所以在VRBA表面形成大的無(wú)色菌落。


    ?燃鵝,我們繼續采用傾注法,在VRBA內部接種沙門(mén)氏菌。結果發(fā)現,沙門(mén)氏菌在VRBA內部形成的小小菌落(圖4)竟然是紅色的!紅色的??!紅色的?。?!


    這是為什么捏?我們試驗所用腸炎沙門(mén)氏菌不發(fā)酵乳糖???難道VRBA培養基中可能存在少量的沙門(mén)氏菌可利用的糖類(lèi),長(cháng)在內部的沙門(mén)氏菌利用該糖產(chǎn)酸,菌落周?chē)囵B基pH值變化,使菌落呈現紅色?

    ? 為此我們做了原料的排查試驗,采用去掉酵母浸粉成分的VRBA,以?xún)A注法接種沙門(mén)氏菌。結果發(fā)現,沙門(mén)氏菌在VRBA內部形成小菌落是無(wú)色的了(圖5黃圈里的菌落)。

    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?


    圖3? 腸炎沙門(mén)氏菌ATCC13076涂布接種

    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?

    圖4? 腸炎沙門(mén)氏菌ATCC13076傾注接種

    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?


    圖5? 腸炎沙門(mén)氏菌ATCC13076傾注接種去掉酵母粉后的VRBA



    酵母浸粉含糖是正常的么?




    ? ? ? 為此我們查閱了酵母提取物中所含的營(yíng)養成分,有資料顯示,酵母提取物含有碳水化合物【1】,而碳水化合物主要來(lái)源于酵母菌的細胞壁和細胞膜【2】,在酵母提取物生產(chǎn)的過(guò)程中,先經(jīng)過(guò)細胞酶解自溶【2】,細胞溶解后,碳水化合物就存在于酵母提取物中。英國食品標準局公布的酵母提取物(調味品類(lèi))的營(yíng)養成分表中,每100g酵母提取物中含糖1.6g。推測酵母提取物本身就含有一定的糖類(lèi)。由于酵母浸粉中本身就含有一定糖類(lèi),沙門(mén)氏菌利用其中的糖類(lèi)產(chǎn)生酸,從而在VRBA內形成了紅色小菌落。

    ? ? ??那么,其他品牌VRBA的酵母浸粉是否含糖類(lèi)呢?為此我們又進(jìn)行了比對試驗,用傾注接種ATCC14028鼠傷寒沙門(mén)氏菌。A-E代表不同品牌的培養基,其中A為陸橋,E為某進(jìn)口品牌。結果發(fā)現沙門(mén)氏菌在A(yíng)、C和E三個(gè)品牌VRBA內部都會(huì )形成小小的紅色菌落,而在B和D品牌VRBA內部卻形成了大的紅色菌落,有些菌落周?chē)€會(huì )有膽酸鹽沉淀(圖6,點(diǎn)擊單圖放大查看),與大腸菌群典型菌落相似。
    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?
    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?
    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?

    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?
    VRBA內的紅色小菌落,有可能是沙門(mén)氏菌?

    圖6? 各品牌的比對試驗



    ? ? ??至此,所有的疑問(wèn)都已解開(kāi)。原來(lái)沙門(mén)氏菌真的會(huì )在VRBA內部形成紅色菌落,但在大部分品牌VRBA上沙門(mén)氏菌菌落很小,與典型大腸菌群還是比較好區分的,且BGLB驗證時(shí)很容易排除。




    參考文獻

    1、Difco&BBL Mannal: Second Edition【M】United States of America, 2009

    2、張曉桐等,酵母提取物提取工藝及應用的研究進(jìn)展【J】中國調味品,2019,002(044):160-163





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