目前已頒布的維生素測定系列標準中都增加了微孔板法，此方法在制作標準系列管、試樣系列管，以及測定吸光度值時(shí)，簡(jiǎn)化了試驗操作，相比之前傳統的“試管法”，節省了大量的準備工作。相信不少檢驗員心里都暗暗竊喜，認為從此就可以從“試管中”解放出來(lái)了，但事實(shí)真的如大家所想嗎？

也許未必！體系的縮小帶來(lái)的是更多精準的要求，任何微小因素的影響都有可能導致試驗失敗。為此，北京陸橋特別推出國標維生素微孔板法即用型產(chǎn)品，為您避開(kāi)影響因素，保證試驗結果的準確性。下面就聽(tīng)小編仔細盤(pán)點(diǎn)影響該實(shí)驗的幾個(gè)重要因素：

一、標準溶液的濃度配制不準確，導致失敗

01 天平精度不達要求，導致稱(chēng)量不準確

標準品應采用高精度天平稱(chēng)量。在葉酸、生物素和泛酸標準中，均規定使用精確至0.1mg（即0.0001g）的天平進(jìn)行標準品的稱(chēng)量；而維生素B12則更需使用精確至0.01mg（即0.00001g）的天平進(jìn)行標準品的稱(chēng)量，以此才能達到精確稱(chēng)量的目的。

02 溶解和轉移操作中標準品的損失

很多實(shí)驗員在用容器溶解標準品并轉移到容量瓶的過(guò)程中，有溶解不充分、溢灑及轉移不完全的情況，這會(huì )導致標準品損失，標準溶液濃度降低。?

03容量瓶定容不準確

標準溶液配制過(guò)程中需多次定容，每次定容都需謹慎對待，一旦哪個(gè)步驟定容不準確，就會(huì )引發(fā)連鎖問(wèn)題。定容后混勻不充分，容量瓶上下顛倒時(shí)發(fā)生漏液情況，或者從高濃度配置低濃度時(shí)，吸取量不準確，都會(huì )導致配制的標準溶液濃度不準確，進(jìn)而導致測定結果偏高或偏低。

微孔板法即用型試劑盒中標準溶液配制VS傳統標準溶液配制

國標微孔板法即用型試劑盒中，提供了定量?jì)龈蓸藴势贰?/span>其標準溶液和標準工作液的配置，只需使用試劑盒中的無(wú)菌水充分溶解標準品凍干試劑即可，十分簡(jiǎn)便。因規避了上述國標方法中標準溶液配制過(guò)程中的諸多不準確因素，保證了標準溶液濃度的準確性。并且標準系列管每個(gè)標準點(diǎn)濃度均與國標要求的濃度一致，標準品同時(shí)提供來(lái)源說(shuō)明，可以溯源，保證大家放心使用。

二、?菌株活性不穩定，導致失敗

01菌株活化及保存不易

四項維生素試驗所需標準菌株（ATCC7469、ATCC7830、ATCC8014）均需嚴格按照菌株說(shuō)明書(shū)進(jìn)行復蘇活化。菌株活化之后，若想長(cháng)期保存，最好采用超低溫冷凍保存法（需要有超低溫冰箱）進(jìn)行保存，才能保證其活力。

02菌株使用不易

標準菌株活化及復蘇后，不能馬上進(jìn)行試驗，至少需使用相應培養基連續傳種2-3代以上，才可以進(jìn)行維生素檢測試驗。否則易出現標準系列管和試樣管不生長(cháng)或生長(cháng)不好的情況。

03菌株活力判斷不易

標準菌株在乳酸桿菌平板或乳酸桿菌肉湯中生長(cháng)良好，肉眼看平板上菌落較大或肉湯中菌液渾濁，但并不等于該菌活力（對特定維生素利用敏感）良好。例如，經(jīng)常有標準系列管吸光度值（即OD值）雖成梯度但整體數值較低的情況。而造成這種情況的原因就是該菌對特定維生素利用不夠敏感，需重新從儲備菌株復蘇并傳代，再次進(jìn)行維生素測定試驗以驗證菌株的活力。

微孔板法即用型試劑盒中凍干菌球VS國標自制接種液

國標微孔板法即用型試劑盒中，提供了凍干定量菌球。該菌球真空包裝，菌濃度定量制備，且可以保證菌株的活力，直接加入培養基中即可使用。相比國標自制接種液，則需要活菌、保菌、提前制備種子液，洗菌、調菌濃度等繁瑣操作，在方便簡(jiǎn)單的同時(shí)，極大的提高了試驗的成功率！同時(shí)，我司還提供了標準菌株的來(lái)源說(shuō)明，可存檔溯源。

三、?培養基影響，導致失敗

維生素測定培養基制備時(shí)也有很多注意事項：

第一、要求從稱(chēng)量勺到配制培養基用的三角瓶，都需經(jīng)過(guò)鹽酸浸泡并至少200℃高溫處理2h，去除維生素殘留干擾，才可以使用，并且最好每個(gè)項目專(zhuān)用一套器材。堅決不可與實(shí)驗室日常檢測用器皿混用，避免混入待測維生素。

第二、培養基配制用水至少需達到二級水標準，才可以使用。

第三、高壓滅菌121℃，5min，滅菌后及時(shí)取出冷卻，避免褐變。

微孔板法即用型試劑盒中即用培養基VS滅菌培養基

國標微孔板法即用型試劑盒中，提供了即用型無(wú)菌液體培養基基礎和凍干添加劑。將培養基中敏感不穩定成分進(jìn)行凍干保存，可以進(jìn)一步確保培養基的性能，使用前將添加劑溶解后與基礎培養基混勻，就可直接使用。一步操作，簡(jiǎn)單方便。

四、?耗材干擾，導致失敗

在過(guò)去幾年的維生素實(shí)驗中，我們經(jīng)常遇到菌生長(cháng)不好、測定結果低、回收率低等情況，分析各種原因時(shí)猛然發(fā)現：原來(lái)一次性耗材也是影響成敗的一環(huán)。因為市售很多耗材含有影響測定菌株生長(cháng)的物質(zhì)，從而導致各種問(wèn)題出現。此外，維生素微孔板法試驗所使用的微孔板必須滿(mǎn)足以下五點(diǎn)才能保證好的實(shí)驗結果：

1）無(wú)菌

2）無(wú)維生素污染

3）有無(wú)菌封口膜且膜能封住每一個(gè)孔，避免孔間不同梯度污染

4）孔深度要夠（因為反應體系需300uL）

5）透度要高（透度影響酶標儀讀數）

市面上滿(mǎn)足無(wú)菌條件的96孔微孔板比較常見(jiàn)，但同時(shí)滿(mǎn)足上述五點(diǎn)要求的不多，需要大家仔細甄別。推薦大家購買(mǎi)我公司精心挑選的微孔板，此微孔板不僅滿(mǎn)足上述5點(diǎn)要求，并且經(jīng)我們試驗驗證微孔板材質(zhì)不含抑菌成分，維生素測定結果比較穩定。

陸橋牌維生素微孔板法試劑盒系列產(chǎn)品

以上是小編精心整理的關(guān)于維生素檢測實(shí)驗中的主要影響因素，也是相對比較難控制和把握的。北京陸橋提供的維生素微孔板法即用型試劑盒系列產(chǎn)品，在幫您避開(kāi)容易導致試驗失敗因素的同時(shí)保障您快速獲得合格的檢測結果，讓維生素檢測變的簡(jiǎn)單！