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GB4789.4-202*《食品安全國家標準 食品微生物檢驗 沙門(mén)氏菌檢驗》征求意見(jiàn)稿和2023版《國家食品污染和有害因素風(fēng)險監測工作手冊》[1]，最大的變動(dòng)之一是將SC更換為RVS。 RVS作為一個(gè)新的培養基被列入了食品安全國家標準的檢測行列，但GB4789.28-2013《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 培養基與試劑的質(zhì)量要求》[2]及其征求意見(jiàn)稿中均未列入該培養基，如何對其進(jìn)行質(zhì)控？各廠(chǎng)家的RVS增菌效果是否相同？對此，我們做了相關(guān)驗證。
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RVS肉湯的原理
培養基中大豆胨提供菌體細胞生長(cháng)所需的碳源、氮源等；氯鹽可以提高培養基體系的滲透壓，磷酸鹽作為緩沖體系維持培養基酸性環(huán)境（pH 5.2±0.2），孔雀綠可以抑制非沙門(mén)氏菌屬細菌的生長(cháng)。該培養基的選擇性表現在高滲透壓、低pH值以及孔雀綠的抑菌效果[3]。
圖:3：RVS肉湯
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RVS肉湯的質(zhì)控方法及比對結果
對比國內外5個(gè)廠(chǎng)家（A?B C D E，其中A為陸橋）的RVS增菌液，按照GB 4789.28-2013 《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 培養基和試劑的質(zhì)量要求》附錄D中SC增菌液的質(zhì)控方法，對RVS增菌液進(jìn)行驗證，結果無(wú)顯著(zhù)性差異。
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RVS肉湯的進(jìn)一步驗證
各廠(chǎng)家RVS增菌液質(zhì)控結果無(wú)顯著(zhù)性差異，是否在實(shí)際檢驗中增菌效果就一致呢？樣品中通常含有大量的雜菌，我們模擬實(shí)際檢測將非目標菌含量提高，參考質(zhì)控方法，選用不同血清型的沙門(mén)氏菌與大腸埃希氏菌ATCC25922混合。選擇低于標準要求的16h和標準范圍內的20h，觀(guān)察增菌速度和增菌效果，開(kāi)展了進(jìn)一步的驗證試驗。
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實(shí)驗方法：
不同血清型的沙門(mén)氏菌（接種量小于50CFU）與大腸埃希氏菌ATCC25922?(接種量為106CFU)混合后接種RVS增菌液，于42℃±1℃培養，分別于16h和20h取增菌液，稀釋到適宜濃度后轉接到沙門(mén)氏菌顯色（SA）（陸橋二代）平板上進(jìn)行計數，觀(guān)察目標菌和非目標菌的生長(cháng)情況。在SA培養基上，目標菌沙門(mén)氏菌呈紫紅色，大腸埃希氏菌為無(wú)色。
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菌株信息：
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結果：?
對于A(yíng)TCC14028,CMCC(B)50976和CICC25045，廠(chǎng)家A和廠(chǎng)家D對目標菌的增菌效果最優(yōu)，廠(chǎng)家A、D、E的抑制性最優(yōu)。（見(jiàn)附錄1?以ATCC14028為例）
對于A(yíng)TCC29934,ATCC12325,CMCC50115和ATCC13076，廠(chǎng)家A對目標菌增菌效果最優(yōu)，廠(chǎng)家A和D的抑制性最優(yōu)。（見(jiàn)附錄2?以ATCC12325為例）
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結論：
由多個(gè)實(shí)驗結果可以得出，綜合7株沙門(mén)氏菌的增菌效果和大腸埃希氏菌的抑制性，廠(chǎng)家A（陸橋）最佳。廠(chǎng)家A（陸橋）可較好的抑制非目標菌--大腸埃希氏菌的生長(cháng)，有效避免了其對沙門(mén)氏菌產(chǎn)生的競爭性抑制，同時(shí)能夠保證目標菌沙門(mén)氏菌良好的促生長(cháng)能力。
? 廠(chǎng)家B和廠(chǎng)家C的表現基本一致，主要是抑制性較差，按照該實(shí)驗方法，7次混菌實(shí)驗都有大量非目標菌的生長(cháng)，這會(huì )增加日常檢測的工作量，且對于腸道沙門(mén)氏菌雙相亞利桑那亞種存在漏檢的風(fēng)險。
? 廠(chǎng)家D的表現與廠(chǎng)家A相似，但是對于腸沙門(mén)氏菌腸亞種鼠傷寒血清型CMCC(B)50115和腸道沙門(mén)氏菌亞種ATCC13076生長(cháng)較差，對于腸道沙門(mén)氏菌雙相亞利桑那亞種ATCC29934和ATCC12325的增菌速度慢且數量少，也存在漏檢風(fēng)險。
廠(chǎng)家E的主要問(wèn)題是對大多數目標菌的增菌能力較弱，有時(shí)會(huì )低其他廠(chǎng)家1個(gè)數量級。
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附錄1：
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圖4：培養16h，5個(gè)廠(chǎng)家接種混菌ATCC14028+ATCC25922的生長(cháng)情況，涂布SA
從上到下依次為A?B C D E
圖5：培養20h，5個(gè)廠(chǎng)家接種混菌ATCC14028+ATCC25922的生長(cháng)情況，涂布SA
從上到下依次為A?B C D E
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附錄2：
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圖6：廠(chǎng)家A（陸橋）在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(cháng)情況
圖7：廠(chǎng)家B在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(cháng)情況
圖8：廠(chǎng)家C在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(cháng)情況
圖9：廠(chǎng)家D在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(cháng)情況
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圖10：廠(chǎng)家E在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長(cháng)情況
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附錄:3
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參考文獻
[1]2023年國家食品污染和有害因素風(fēng)險監測工作手冊[S]
[2]?GB4789.28-2013，《食品安全國家標準 培養基與試劑的檢查要求》[S]
[3]李瑾,劉振,何艷玲.微生物干粉培養基質(zhì)控圖解手冊[M].北京科學(xué)技術(shù)出版社,2007.