? ? ? ? 每個(gè)檢驗實(shí)驗室都應當對自己做出的樣品檢測結果負責，如同每個(gè)工廠(chǎng)都會(huì )對自己生產(chǎn)的產(chǎn)品負責。工廠(chǎng)會(huì )制定各種質(zhì)控方法和措施去保證產(chǎn)品的各項指標和參數滿(mǎn)足要求，從而確保產(chǎn)品的品質(zhì)。實(shí)驗室自然也會(huì )制定各種質(zhì)量監控方法去保證檢驗結果的準確和可靠。
圖A.1 實(shí)驗室質(zhì)量監控流程圖
? ? ? ?上圖為實(shí)驗室質(zhì)量監控的流程圖，出自RB/T 038-2020 《食品微生物檢測結果質(zhì)量監控指南》的附錄A，流程圖中涉及的環(huán)節很多，受篇幅限制，本文重點(diǎn)介紹其中的一個(gè)核心環(huán)節，即評價(jià)依據，包括流程圖中的數據統計分析和結果評價(jià)。
對于內部質(zhì)量監控方案應預先設定評價(jià)依據，不同評價(jià)依據對應不同的測試統計量，并應與所策劃的質(zhì)量監控方式對應。實(shí)驗室可自行設定評價(jià)依據，包括但不限于：
a)監控結果與添加目標微生物的一致性；
b)方法中規定或實(shí)驗室通過(guò)方法驗證所獲得的質(zhì)量指標(如重復性限、再現性限、回收率等);
c)有證標準物質(zhì)/標準樣品(如有證標準菌株)、標準物質(zhì)/標準樣品(如標準菌株)或質(zhì)控樣品的特征值；
d)控制圖的警示限和控制限;
e)公認值，如同一操作者對同一平板重復計數，其差異應在5%之內，不同操作者對同一平板重復計數，其差異應在10%之內；
f)實(shí)驗室內部的經(jīng)驗值。
以上是常用的評價(jià)依據，除了f項的經(jīng)驗值外，我們將逐條給大家介紹。
a)監控結果與添加目標微生物的一致性
本項適合于定性檢測項目的質(zhì)量監控。通常直接將監控結果與指定值進(jìn)行比較，兩者一致視為“滿(mǎn)意”或“正確”，不一致則視為“不滿(mǎn)意”或“不正確”。比如某實(shí)驗室計劃開(kāi)展沙門(mén)氏菌項目的質(zhì)量監控，在一個(gè)經(jīng)檢驗無(wú)沙門(mén)氏菌的樣品中人工添加了一定量沙門(mén)氏菌標準菌，混勻后使樣品中沙門(mén)氏菌含量在10-100CFU/25g。將此自制質(zhì)控樣品讓實(shí)驗室進(jìn)行檢驗，此自制質(zhì)控樣品的指定值就是陽(yáng)性，如果實(shí)驗室檢驗后報告結果為陽(yáng)性，那么監控結果與指定值一致，視為“滿(mǎn)意”或“正確”；如果實(shí)驗室檢驗后報告結果為陰性，那么監控結果與指定值不一致，視為“不滿(mǎn)意”或“不正確”。定性檢測項目的評價(jià)方式是很直接的，一般不涉及統計量。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.1條。
e)公認值，如同一操作者對同一平板重復計數，其差異應在5%之內，不同操作者對同一平板重復計數，其差異應在10%之內；
公認值可以理解為一種行業(yè)內的默認值。條款中的舉例是針對定量項目檢驗流程中平板計數這一個(gè)步驟的監控。5%和10%就是公認值，此方法可用于內部人員比對監控方式的評價(jià)。
評價(jià)依據的a和e兩項都比較簡(jiǎn)單，我們下面重點(diǎn)介紹b，c，d三項。此三項都用于定量檢測項目。
b)方法中規定或實(shí)驗室通過(guò)方法驗證所獲得的質(zhì)量指標(如重復性限、再現性限、回收率等);
此項是利用標準方法規定的質(zhì)量指標進(jìn)行統計分析和評價(jià)。實(shí)際工作中經(jīng)常利用的指標有三個(gè)，分別是重復性限（r）、加標回收率和置信區間。在ISO標準體系中，此三個(gè)指標都明確給出，可以直接利用。但是國標體系中重復性限（r）和加標回收兩個(gè)指標在微生物檢測方法中很少提及，所以可以直接參考ISO標準指標或自行通過(guò)方法驗證獲得。
b.1)重復性限（r）
以ISO 4833-1-2013《食品鏈微生物學(xué) 微生物計數的水平方法 第1部分：30°C傾注平板菌落計數》為例，此標準提供的指標是以生奶或巴氏殺菌奶為基質(zhì)重復性限（r）為0.25（log10）。重復性限（r）是指在同一實(shí)驗室，由同一操作人員使用相同的設備，按相同的測試方法，在短時(shí)間內對同一被測對象進(jìn)行的兩次獨立測試結果對數值之差不得大于0.25（log10）。也就是說(shuō)，如果以重復性限（r）指標進(jìn)行菌落總數的內部質(zhì)量監控，那么第一次實(shí)驗結果是1.0×105CFU/g，轉log值后為5（log10），根據重復性限（r）為0.25（log10）的要求，第二次實(shí)驗結果應該在5±0.25（log10），即4.75-5.25（log10）之間。轉換為CFU值就是5.6×104-1.8×105CFU/g之間。如果第二次實(shí)驗的真實(shí)結果落在此范圍內，那么本次內部質(zhì)量監控的結果為“滿(mǎn)意”。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.1條。
b.2)加標回收率
此指標在微生物檢測標準中涉及很少，目前只有ISO 9308-1-2014《水質(zhì)大腸埃希氏菌和大腸菌群計數 第1部分低背景菌群水的膜過(guò)濾法》中有提及，所以本文不再展開(kāi)詳述。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.2條。
b.3)置信區間
置信區間指標主要在最可能數（MPN）計數法中提及。在再現性條件下，對樣品進(jìn)行分析所得重復測試結果，如果試驗組結果在對照組結果的95%置信區間內，則可認為試驗組結果與對照組結果沒(méi)有顯著(zhù)性差異。例如：假設某一對照組人員按照GB4789.3第一法進(jìn)行大腸菌群測試計數，陽(yáng)性管數為3-2-1，查MPN表得到150 MPN，查MPN表又可知其95%置信區間的上限為420 MPN,下限為37 MPN，那么另一試驗組人員檢測結果所得MPN值在37~420之間，均可認為試驗組人員的測試結果與對照組人員的測試結果沒(méi)有顯著(zhù)性差異。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.3條。
c)有證標準物質(zhì)/標準樣品(如有證標準菌株)、標準物質(zhì)/標準樣品(如標準菌株)或質(zhì)控樣品的特征值；
此項是利用有證標準物質(zhì)/標準樣品(如有證標準菌株)、標準物質(zhì)/標準樣品(如標準菌株)或質(zhì)控樣品的特征值來(lái)進(jìn)行統計分析和評價(jià)。其中最推薦的是質(zhì)控樣品。目前國內常見(jiàn)質(zhì)控樣品都會(huì )提供特性值和特性值區間。以中國檢科院質(zhì)控樣為例，證書(shū)上會(huì )提供以下參數，包括特性值、標準差和特性值區間。
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? ? ? ? 如果用此質(zhì)控樣品進(jìn)行檢測，只要檢測結果落在特性值區間內，則視為“滿(mǎn)意”。越接近特性值，說(shuō)明實(shí)驗誤差越小。
質(zhì)控樣品特性值區間是根據特性值和標準差，利用區間估計的公式進(jìn)行計算而得。公式如下：
式中：
CI----置信區間；
μ0----平均菌落數；
S----標準差；
k----包含因子。
? 以上述截圖的質(zhì)控樣證書(shū)為例：大腸埃希氏菌質(zhì)控樣的平均菌落數，也就是特性值為3.022（log10CFU/mL）,對應菌落數為1051 CFU/mL，修約后為1100 CFU/mL，標準差為0.483（log10CFU/mL），此數值應該是由log值計算出，所以沒(méi)有轉換回菌落數的意義。那么CI=3.022±k×0.483。當k=1時(shí)，表示所有測量均值中有68%的值落在2.539 ~3.505（log10CFU/mL）之間；當k=2時(shí)，表示所有測量均值中有95%的值落在2.056 ~3.988（log10?CFU/mL）之間，當k=3時(shí)，表示所有測量均值中有99.7%的值落在1.573~4.471（log10?CFU/mL）之間。本質(zhì)控樣品選用了k=2, 所有測量均值有95%的值落在2.056 ~3.988（log10?CFU/mL）之間，即菌落數為110-9700 CFU/mL。這就是特性值區間的意義。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.4條。
如果質(zhì)控樣品可以提供擴展測量不確定度，并且檢驗實(shí)驗室自身已經(jīng)計算過(guò)自己實(shí)驗室該項目的擴展測量不確定度，則可以利用此類(lèi)質(zhì)控樣品的信息進(jìn)行評價(jià)。統計量為En值。|En|≤1，表明測量結果的質(zhì)量得到保證，無(wú)需采取進(jìn)一步措施；|En|>1，表明測量結果的質(zhì)量失控，宜查找原因并迅速采取糾正措施。由于此統計量使用較少，本文不再展開(kāi)介紹公式和計算過(guò)程。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.5條。
目前在國內檢測行業(yè)中將質(zhì)控樣品直接用于內部質(zhì)量監控的情況最為常見(jiàn)，一般質(zhì)控樣品也直接提供特性值和特性值區間，無(wú)需檢測實(shí)驗室自行計算置信區間。所以檢測實(shí)驗室直接購買(mǎi)質(zhì)控樣品是最省時(shí)省力的內部質(zhì)量監控方式。
d)控制圖的警示限和控制限;
d項是利用控制圖進(jìn)行統計分析及評價(jià)。在室內再現性條件下，食品微生物檢測數據滿(mǎn)足正態(tài)分布時(shí)，可使用控制圖進(jìn)行質(zhì)量監控。以代表時(shí)間或順序抽取的樣品號為橫坐標，以代表質(zhì)量水平的特征值為縱坐標，繪制控制圖。通常使用單值-移動(dòng)極差控制圖(X-Rm控制圖)監控菌落計數結果的準確性和精密度，也可用于監控MPN法計數結果。構建單值-移動(dòng)極差控制圖(X-Rm控制圖)時(shí)原則上需要20個(gè)以上測試數據。宜在日常檢測過(guò)程中檢測相應的質(zhì)量監控樣品。將質(zhì)控數據處理后，按時(shí)間順序繪制在建立好的控制圖上。下列任何一種情況是不能接受的，過(guò)程可能失控：
a)一個(gè)或多個(gè)連續值超出“控制限”;
b)連續3次觀(guān)察中有兩次超過(guò)同一“警示限”;
c)連續9次觀(guān)測值在平均值的同一側；
d)連續6次觀(guān)測值穩步上升或下降。
一旦識別出失控，應立即進(jìn)行不符合調查，采取適當的風(fēng)險應對措施。
控制圖適合連續監控，平時(shí)使用較少，本文不再展開(kāi)計算過(guò)程，僅展示某次實(shí)驗的X-Rm控制圖供大家參考。詳見(jiàn)RB/T 038-2020的7.2.2.7條。
以上就是本文給大家介紹的幾種內部質(zhì)量監控的評價(jià)依據，其中a項適合定性項目，e項比較簡(jiǎn)單直觀(guān)。b、c、d三項是用于定量項目監控比較多的評價(jià)依據，其中b和c項又各自有幾種不同的評價(jià)依據，各位檢測行業(yè)的老師可以根據自己實(shí)驗室的實(shí)際情況進(jìn)行選擇。一般情況下，選擇市售合格的質(zhì)控樣品，直接參考證書(shū)給出的特性值和特性值范圍進(jìn)行評價(jià)是最簡(jiǎn)單的辦法。
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參考文獻：
1、RB/T 038-2020 食品微生物檢測結果質(zhì)量監控指南
2、ISO 4833-1-2013食品鏈微生物學(xué) 微生物計數的水平方法 第1部分：30°C傾注平板菌落計數