近期愛(ài)爾蘭奶粉污染沙門(mén)氏菌的事件鬧的人心惶惶，雖然愛(ài)爾蘭政府后來(lái)發(fā)布公告表示未在任何愛(ài)爾蘭配方奶粉生產(chǎn)廠(chǎng)家發(fā)現沙門(mén)氏菌，但我們也不能忽視對沙門(mén)氏菌的檢驗，嬰幼兒的免疫系統較為脆弱，尤其是高度易感嬰兒，比如早產(chǎn)兒、低出生體重嬰兒、免疫缺陷嬰兒等，一旦喂食了被沙門(mén)氏菌污染的嬰幼兒配方乳粉，極易被感染致病，出現發(fā)燒、腹瀉等腸炎癥狀，嚴重的可能會(huì )引發(fā)敗血癥，甚至死亡。
下面讓我們溫習一下GB4789.4-2016沙門(mén)氏菌的檢驗過(guò)程及操作時(shí)的注意事項。
預增菌
樣品加入緩沖蛋白胨水（BPW）中進(jìn)行預增菌，任何樣品均需進(jìn)行預增菌。有盆友問(wèn)啦，為什么要用BPW呢？那是因為啊，食品在加工過(guò)程中采用加熱、干燥等加工工藝使得細胞存在不同程度的受損，而緩沖蛋白胨水（BPW）呢，作為非選擇性的增菌培養基，較高pH的緩沖體系可以幫助受損的細胞恢復到穩定、活力滿(mǎn)滿(mǎn)的生理狀態(tài)，此處也可使用即用型的BPW，因為它操作方便，節省時(shí)間。
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選擇性增菌
這里要注意啦，增菌接種前一定要把預增菌后的BPW樣品溶液輕輕搖動(dòng)混勻，這樣做的原因是有些沙門(mén)君是懶得動(dòng)的（因為有些沙門(mén)氏菌沒(méi)鞭毛），它們會(huì )潛伏在溶液底層，所以我們要把增菌液“搖擺、搖擺”，讓不動(dòng)的沙門(mén)君們在增菌液中都漂浮起來(lái)，吸出，分別接入TTB和SC培養基中。
此步驟防止漏檢的方式是采用兩種不同的選擇性增菌液（TTB和SC）進(jìn)行增菌，是因為沙門(mén)君的家族太龐大了，血清型都有2000多種，所以得加強引誘措施，采用不同的培養溫度和不同抑制性的培養基來(lái)給不同的沙門(mén)君提供安逸的環(huán)境來(lái)繁衍后代，同時(shí)盡量阻攔革蘭氏陽(yáng)性菌和其他大多數的腸道菌來(lái)?yè)v亂，有些細菌還是會(huì )趁虛而入的。
下面咱們來(lái)說(shuō)一下TTB和SC使用過(guò)程中的注意事項：
TTB培養基：待基礎培養基冷卻至50℃以下時(shí)，加入煌綠和碘液，因為培養基中含有不溶解的CaCO3（用來(lái)中和吸收有毒性的代謝物質(zhì)），會(huì )有大量的白色沉淀，在分裝時(shí)應邊搖勻邊分裝，接種后培養條件為：42℃±1℃培養18h-24h；
SC培養基：千萬(wàn)不可高壓滅菌，不可過(guò)度加熱，最好是現用現配。發(fā)現干粉或溶液變紅就不要使用了。培養基開(kāi)封后建議用封口膜密封后冷藏保存，可延緩培養基變質(zhì)，接種后培養條件為：36℃±1℃培養18h-24h；
增菌后的TTB與SC
分離
TTB與SC增菌液在接種選擇性分離培養基前，均應輕輕搖動(dòng)混勻，原因同選擇性增菌一樣，也是為了防止不運動(dòng)的沙門(mén)氏菌漏檢；混勻后，用直徑為3mm的接種環(huán)（也就是實(shí)驗室用的10μL接種環(huán)）將TTB與SC增菌液“分別”劃線(xiàn)接種于兩種選擇性平板，一種是BS瓊脂，為必選的選擇性分離培養基，另外一種選擇性分離培養基是從XLD瓊脂、HE瓊脂、沙門(mén)顯色培養基中選擇一個(gè)即可；沙門(mén)氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征參考下圖：
注意：在一種選擇性瓊脂培養基上不同沙門(mén)氏菌會(huì )長(cháng)出不同的菌落形態(tài)，在做樣品檢驗時(shí)要參考上圖中沙門(mén)氏菌的菌落特征，將典型菌落及可疑菌落純化后做生化和血清鑒定，避免漏檢，例如：在XLD瓊脂接菌培養18h-24h時(shí)，鼠傷寒沙門(mén)氏菌為粉紅色菌落，呈現大的帶光澤的黑色中心，大腸埃希氏菌為黃色菌落，豬霍亂沙門(mén)氏菌為淡黃色菌落，比大腸埃希氏菌的顏色略淺，易混淆，為防止漏檢，XLD瓊脂平板上黃色菌落也應做生化和血清鑒定，不可忽視。
下面咱們來(lái)說(shuō)一下選擇性瓊脂培養基使用過(guò)程中的注意事項：
BS瓊脂：配制時(shí)不可高壓，煮沸滅菌即可，不可反復溶解，避免降低其選擇性；特別需要注意的一點(diǎn)是必須使用前一天配制，且在48h內使用，超過(guò)48h也會(huì )降低其選擇性，請于室溫暗處貯存，接種后培養條件為：36℃±1℃培養40h-48h；
XLD瓊脂：配制時(shí)不可高壓，煮沸滅菌即可，不可反復溶解，避免降低其選擇性，請于室溫暗處貯存；該培養基宜于當天配置，第二天使用，接種后培養條件為：36℃±1℃培養18h-24h；
?HE瓊脂：配制時(shí)不可高壓，煮沸滅菌即可，不可反復溶解，避免降低其選擇性；接種后培養條件為：36℃±1℃培養18h-24h；
沙門(mén)氏菌顯色培養基：參考陸橋ESM005沙門(mén)氏菌顯色培養基（SA）使用說(shuō)明書(shū)。
好啦，咱們今天就先到這吧，關(guān)于沙門(mén)氏菌的生化和血清試驗操作下篇文章再細細道來(lái)。