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    真菌毒素檢測技術(shù)——伏馬毒素篇

    發(fā)布時(shí)間: 2019-11-25

    真菌毒素檢測技術(shù)——伏馬毒素篇



    1.?伏馬毒素簡(jiǎn)介


    伏馬毒素(Fumnosins)是由串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme)、輪狀鐮刀菌(Fusarium verticillioides)等在合適的環(huán)境下生成的次級代謝產(chǎn)物。因鐮刀屬真菌是污染玉米、高粱、小麥等農作物的優(yōu)勢菌種,故伏馬毒素可通過(guò)食物鏈傳播影響人和動(dòng)物的健康。1998年,Gelderblom首次從串珠鐮刀菌培養液里分離獲得伏馬毒素,時(shí)至今日,已鑒定出28種不同的異構體。伏馬毒素均為結構類(lèi)似的雙酯化合物,直鏈骨架含有19或20個(gè)碳原子,各種羧、羥基、酯鍵分布在骨架兩側。到目前為止,發(fā)現的伏馬菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC2、FC3、FC4和FP1共11種,其中伏馬毒素B1(FB1)是其主要組分。FB1對食品污染的情況在世界范圍內普遍存在,主要污染玉米及玉米制品。FB1為水溶性霉菌毒素,對熱穩定,不易被蒸煮破壞,所以同黃曲霉毒素(AFT)一樣,控制農作物在生長(cháng)、收獲和儲存過(guò)程中的霉菌污染仍然是至關(guān)重要,伏馬毒素可以通過(guò)糧食加工、飼料生產(chǎn)等過(guò)程對畜牧業(yè)乃至人類(lèi)健康產(chǎn)生較嚴重的危害。

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    圖1?伏馬毒素B1結構式


    2. 伏馬毒素的限量標準


    2017年10月27日,世界衛生組織國際癌癥研究機構公布的致癌物清單初步整理參考,伏馬毒素B1、串珠鐮刀菌及其產(chǎn)生的毒素(伏馬毒素B1、伏馬毒素B2和鐮刀菌素C)在2B類(lèi)致癌物清單中。

    我國飼料衛生標準GB 13078-2017中飼料原料和飼料產(chǎn)品中伏馬毒素的含量規定如下:


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    3.?酶聯(lián)免疫法檢測伏馬毒素


    定量檢測原理基于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)。酶標板微孔包被有伏馬毒素特異性抗體,伏馬毒素標準品或樣品以及伏馬毒素-HRP酶結合物(檢測溶液)加入包被有抗體的微孔中。伏馬毒素-HRP酶結合物與標準品或樣品中的伏馬毒素競爭結合伏馬毒素抗體。未結合的伏馬毒素-HRP酶結合物在洗滌步驟中洗去。加入底物溶液后,產(chǎn)生藍色物質(zhì)。加入終止液終止反應,藍色物質(zhì)變成黃色。450nm下測定吸光值,吸收光的強度與樣品和標準品中伏馬毒素的濃度成反比。


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    圖2 ?B2896伏馬毒素試劑盒


    4.Symmetric?側向層析試紙條檢測伏馬毒素


    定量側向層析檢測基于免疫層析測定原理。微孔中有耦合在膠體金上的伏馬毒素抗體。在微孔中加入待測液,反復吹打形成懸浮混合液后開(kāi)始孵育。在孵育過(guò)程中,伏馬毒素(若存在)與膠體金抗體結合,達到抑制檢測線(xiàn)顯色的效果。將試紙條插入混合液中,液體沿試紙條垂直向上層析并層析至檢測區(檢測區內有控制線(xiàn)和檢測線(xiàn))。測試有效時(shí),上方的控制線(xiàn)會(huì )顯色。檢測線(xiàn)的顏色深淺與樣品中伏馬毒素濃度成反比。通過(guò)使用 S-Flow 軟件及對稱(chēng)定量技術(shù)可以準確測定伏馬毒素的濃度。


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    3 ?S-FLOW讀數儀


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