乳酸菌是能利用可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的一類(lèi)無(wú)芽孢、革蘭氏染色陽(yáng)性細菌。乳酸菌對營(yíng)養的需求比較復雜,生長(cháng)需要碳水化合物、氨基酸、肽類(lèi)、維生素、礦物質(zhì)、脂肪酸、酯類(lèi)、核酸衍生物等,一般的肉湯培養基難以滿(mǎn)足其營(yíng)養要求。在乳酸菌檢測中,國內外相關(guān)標準用于嗜熱鏈球菌計數的培養基主要有兩個(gè):M17瓊脂和MC培養基,兩者在嗜熱鏈球菌計數中有哪些區別呢?
01 先說(shuō)M17瓊脂
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M17瓊脂可用于從發(fā)酵乳等產(chǎn)品中檢測、分離和富集嗜熱鏈球菌(Strept.thermophilus)。M17瓊脂作為分離嗜熱鏈球菌的標準培養基,不僅可用于改善嗜熱鏈球菌及其噬菌體的生長(cháng),在培養苛養的乳酪鏈球菌(Strept. cremoris)、丁二酮鏈球菌(Strept. diacetilactis)和乳鏈球菌(Strept. Iactis)方面,M17培養基的表現也優(yōu)于其它同類(lèi)培養基。
在培養過(guò)程中,酸度過(guò)低會(huì )嚴重影響嗜熱鏈球菌的生長(cháng)。成分中大量的β-甘油磷酸鈉具有良好的緩沖能力,防止pH的迅速降低,維持體系pH>5.7。同時(shí)β-甘油磷酸鈉抑制酸奶中的乳桿菌的生長(cháng),如保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus),非常適合發(fā)酵乳中的嗜熱鏈球菌的計數與復蘇。成分中的胨和牛肉浸粉提供氮源、碳源、維生素和礦物質(zhì),酵母粉提供嗜熱鏈球菌生長(cháng)所需的B族維生素,抗壞血酸起促進(jìn)生長(cháng)的作用,硫酸鎂提供生長(cháng)所必需的鎂離子。

02 再說(shuō)MC培養基
MC培養基也是用于嗜熱鏈球菌計數的標準培養基,主要依靠溶鈣圈法(一些產(chǎn)酸細菌在含有CaCO3的培養基上產(chǎn)生CaCO3溶解圈)對乳酸菌進(jìn)行篩選。
大豆蛋白胨、牛肉粉、酵母粉提供菌體生長(cháng)所需的氮源、碳源、維生素、礦物質(zhì)及其他的營(yíng)養元素,葡萄糖和乳糖作為碳水化合物促進(jìn)乳酸菌的生長(cháng),碳酸鈣中和菌體代謝產(chǎn)生的酸,以緩解其對細胞的酸毒性,鑒別出能產(chǎn)生酸的細菌,并維持培養基的pH值,中性紅作為酸堿指示劑。

03 兩種培養基比對
現在我們知道了M17瓊脂與MC培養基的性能特點(diǎn)及適用范圍,下面我們再來(lái)看一下它們的具體應用。
先來(lái)比較乳酸菌標準菌株在兩種培養基上的菌落形態(tài)和生長(cháng)情況。


再來(lái)比較兩種培養基對酸奶樣品中嗜熱鏈球菌計數的應用。實(shí)驗選取20種不同品牌的市售酸奶進(jìn)行計數,發(fā)現M17瓊脂上的菌落數普遍高于MC培養基。隨機選取10種樣品培養后的M17瓊脂和MC培養基,每個(gè)平板挑取10個(gè)菌落進(jìn)行鏡檢,某一樣品的M17瓊脂上發(fā)現生長(cháng)良好的乳桿菌,如下圖所示(該酸奶樣品所含乳酸菌:嗜熱鏈球菌?保加利亞乳桿菌?鼠李糖乳桿菌?嗜酸乳桿菌(H-A3)?長(cháng)雙歧桿菌(H-B46)干酪乳桿菌)

MC培養基上嗜熱鏈球菌與乳桿菌的區分


總結
根據筆者的實(shí)驗結果,以及對國內外研究進(jìn)展的分析,對兩種培養基的區別進(jìn)行了簡(jiǎn)要匯總。
1.菌落大小及數量:與MC培養基相比,在M17瓊脂上生長(cháng)的嗜熱鏈球菌菌落更大、數量更多,回收率更高。差異來(lái)源于培養基營(yíng)養成分和緩沖體系的不同。與M17瓊脂相比,MC培養基中的緩沖體系是碳酸鈣,其緩沖能力弱于β-甘油磷酸鈉。
2.菌落觀(guān)察計數:M17瓊脂上菌落更加清晰,方便計數。因為M17瓊脂不含有碳酸鈣,培養基透明度好,方便計數。
3.菌株生長(cháng)情況:MC培養基特異性更強。一些乳酸桿菌在M17瓊脂上可生長(cháng)且與嗜熱鏈球菌無(wú)法區分。
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