1
革蘭氏染色
在很多微生物檢驗標準中都會(huì )涉及到染色鏡檢這一步，其中絕大部分都是指的革蘭氏染色。
原理
革蘭氏陽(yáng)性細菌細胞壁主要由肽聚糖形成的致密網(wǎng)狀結構組成，壁厚，類(lèi)脂含量低，交聯(lián)度高，用乙醇處理后，發(fā)生脫水作用，肽聚糖層孔徑縮小，通透性降低，從而使結晶紫-碘復合物不易被洗脫而保留在細胞內，故細菌仍保留初染時(shí)的紫色。
革蘭氏陰性細菌細胞壁肽聚糖層較薄，交聯(lián)度低，含較多類(lèi)脂質(zhì)，故用乙醇處理后，類(lèi)脂質(zhì)被溶解，細胞壁孔徑變大，通透性增加，使初染的結晶紫和碘的復合物易于滲出，細胞被脫色，經(jīng)沙黃復染后呈紅色。
染色步驟
革蘭氏染色注意事項
1.選用活躍生長(cháng)期菌種染色，老齡的革蘭氏陽(yáng)性細菌細胞壁通透性發(fā)生改變容易被染成紅色而造成假陰性。
2.涂片不宜過(guò)厚，以免脫色不完全造成假陽(yáng)性。
3.脫色是革蘭氏染色是否成功的關(guān)鍵，脫色不夠造成假陽(yáng)性，脫色過(guò)度造成假陰性。
樣品中分離芽孢桿菌的革蘭氏染色
（紫色為菌體，芽孢無(wú)法著(zhù)色）
2
結晶紫染色
《GB 4789.26-2013 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 商業(yè)無(wú)菌檢驗》中還涉及到一種染色方法：結晶紫單染色。
結晶紫是一種堿性染料，能夠將細胞質(zhì)內核酸染色。結晶紫單染色通過(guò)結晶紫染色液進(jìn)行染色，使微生物細胞與背景形成鮮明的對比，易于在顯微鏡下觀(guān)察菌體的一般形態(tài)。
01
涂片
針對商業(yè)無(wú)菌檢驗時(shí)，涂片方法為----帶湯汁的樣品，可用接種環(huán)挑取湯汁涂于載玻片上，固態(tài)食品可直接涂片或用少量滅菌生理鹽水稀釋后涂片，待干后用火焰固定。油脂食品涂片自然干燥并火焰固定后，用二甲苯流洗，自然干燥。
對于一般微生物的結晶紫單染色，涂片方法可參考革蘭氏染色。
02
染色
將涂片在酒精燈火焰上固定，滴加結晶紫染液，染1min，水洗。
03
鏡檢
針對商業(yè)無(wú)菌檢驗時(shí)，應至少觀(guān)察 5 個(gè)視野，記錄菌體的形態(tài)特征以及每個(gè)視野的菌數。與同批冷藏保存對照樣品相比， 判斷是否有明顯的微生物增殖現象。菌數有百倍或百倍以上的增長(cháng)則判為明顯增殖。
混合微生物菌體的結晶紫單染
(大橢圓為釀酒酵母ATCC9763，桿菌為大腸桿菌ATCC25922，球菌為金黃色葡萄球菌ATCC6538)
3
芽孢染色
芽孢染色法是利用細菌的芽孢和菌體對染料親和力不同的原理，用不同的染料進(jìn)行著(zhù)色使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區分。
試劑
5%孔雀石綠染色液----給芽孢染色，使芽孢呈綠色；
沙黃染色液----給菌體染色，使菌體呈紅色。
芽孢染色的方法大家可以查看我們之前的推文“芽孢染色方法介紹”。在這篇文章中我們詳細地介紹了傳統的芽孢染色操作方法，并且對其操作方法進(jìn)行了改良，使其更便于操作，大家不妨看一看。
芽孢染色鏡檢圖片
（紅色為菌體，藍綠色為芽孢）
4
蛋白毒素結晶染色
在《GB 4789.14-2014 食品微生物學(xué)檢驗 蠟樣芽胞桿菌檢驗》標準中，我們需要做革蘭氏染色鏡檢，在此基礎上也可以做芽孢染色。除此之外，蛋白毒素結晶染色也是我們繞不過(guò)去的一道坎。
蠟樣芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌除了用蛋白毒素結晶染色外，以生化鑒定的方式是無(wú)法將它們區分開(kāi)的。所以蛋白毒素結晶染色對于蠟樣芽孢桿菌檢驗來(lái)說(shuō)也是很關(guān)鍵的一步。
培養基：硫酸錳營(yíng)養瓊脂----用于培養菌體，其有利于蘇云金芽孢桿菌蛋白毒素結晶的產(chǎn)生；
試劑：甲醇、0.5%堿性復紅染液
小伙伴們如果不會(huì )做蛋白毒素結晶染色的話(huà)，那就來(lái)看看“蠟樣芽孢桿菌檢驗，知多少？”這篇文章吧。相信大家看完這篇文章，做起蛋白毒素結晶染色來(lái)肯定就得心應手了。
蛋白毒素結晶染色鏡檢圖片
（紅色箭頭所指為蛋白毒素結晶，藍色所指為芽孢）
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