受寒潮影響，我國多地區出現大范圍低溫雨雪凝凍天氣，戶(hù)外低溫，室內環(huán)境溫度也隨之受到較大影響。在ELISA檢測工作中，實(shí)驗室環(huán)境溫度如何控制呢？檢測過(guò)程中還有哪些注意事項……小編給您實(shí)戰經(jīng)驗分享。

ELISA試劑盒檢測技巧及經(jīng)驗分享

?

酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測法具有敏感性高，特異性強，快速等特點(diǎn)，目前廣泛應用于農獸藥、真菌毒素殘留檢測。但該方法從加樣、洗板、顯色到讀數步驟繁多，其中的每一步控制不好都可能影響檢測結果的準確性。因此，在實(shí)際測定操作中一定要注意以下幾點(diǎn)。

一、溫度

1. 試劑盒回溫

大多數ELISA檢測試劑盒為冷藏（2℃-8℃）保存。從冰箱拿出來(lái)后，先不要急于打開(kāi)試劑盒，要等試劑盒的溫度平衡至室溫且試劑盒盒表面無(wú)冷凝水。檢測所用的試劑需充分混勻且徹底溶解后再用。

Tip：提前1~2小時(shí)取出試劑盒，放在室溫中；或在預設25℃恒溫培養箱中平衡30分鐘~60分鐘。

2. 環(huán)境溫度的控制

實(shí)驗室可采用以下措施控制溫度：

1）實(shí)驗室應配備溫濕度表，且確保定期計量。

2）根據天氣情況設定實(shí)驗室空調制冷或加溫功能，待室溫穩定且無(wú)干擾的條件下再開(kāi)始檢測流程。

3）選用帶溫控裝置的孵育儀器，如恒溫孵育器、恒溫培養箱、多功能酶標儀等。注意要提前開(kāi)啟預熱。

Tip：大多數試劑盒加樣后反應時(shí)間較短，環(huán)境溫度對檢測結果會(huì )有很大影響，所以控制好環(huán)境溫度是保證試劑盒檢測結果有效的重要因素。

3. 孵育

孵育時(shí)要保證溫度均勻，防止揮發(fā)變干。孵育時(shí)使用封板膜，并置于暗處孵育。多塊板一起實(shí)驗時(shí)，要平放各板，不要疊放，避免溫度擴散的不均勻性或邊緣效應。

圖1 ?ELISA試劑盒檢測孵育中

二、剩余試劑的妥善保存

試劑盒恢復至室溫后，取出要使用的酶標板孔，未使用的酶標板孔應及時(shí)放回鋁箔袋，加入干燥劑，封緊封口，2℃-8℃冷藏保存。

Tip: 切忌將未完全平衡至室溫的酶標板放回鋁箔袋，因為此時(shí)由于溫度差，酶標板上會(huì )有水汽，不利于穩定保存。

三、加樣

1. 加樣要快速準確，時(shí)間宜控制在 15 分鐘內。

2. 如樣品量較大，可分次完成實(shí)驗，或將測樣液置于預混微孔板中使用多通道移液器快速移取。

3. 如吸取同一試劑，可將試劑倒入V型加樣槽中，使用多通道移液器快速移取。

Tip：在加樣槽上套上一次性PE手套，再倒入檢測用試劑，可以保證試劑完整性且不被污染。加樣槽更換一次性手套后可繼續下一種試劑的使用。

?

? 四、手動(dòng)洗板操作指南

?　? 1. 當洗滌緩沖液有結晶析出時(shí)，可用手反復揉搓瓶體使結晶物充分溶解再配制。

2. 加洗液要快速，沒(méi)有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。

3. 加好洗液后輕輕搖動(dòng)微孔板。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍干，選用無(wú)粉塵和碎屑的優(yōu)質(zhì)吸水紙。需要用力拍板，使孔內沒(méi)有可見(jiàn)液體掛壁。

4. 不能讓樣品干太久。酶標板拍干后立即做后續的加液。

? ?Tip：拍板用的吸水紙可選擇廚房用紙，吸水性好且無(wú)碎屑。為保證微孔洗液浸泡時(shí)間一致，可采用從前至后和從后至前的順序交替加洗液的方法。

?

? 五、預實(shí)驗的必要性

?　??1. 通過(guò)預實(shí)驗可以熟悉整個(gè)實(shí)驗的流程，發(fā)現可能忽略的問(wèn)題；

2. 可以測試樣本和試劑盒是否匹配，一旦出現不匹配的情況，不至于浪費過(guò)多樣本；

3. 可以對樣品中目的分析物的濃度作一下大致參考，以確定合適稀釋度。

?

關(guān)注以上幾個(gè)方面，希望對大家的ELISA檢測工作起到一定的幫助。