克羅諾桿菌的危害

克羅諾桿菌是一種條件致病菌，高風(fēng)險人群主要是嬰幼兒，特別是早產(chǎn)兒、低出生體重兒和免疫力低下人群，可引起嚴重的壞死性小腸結腸炎、菌血癥和腦膜炎等疾病，死亡率高達40%~80%。

因為該菌的強致病性、高死亡率以及易感人群的特殊性。所以，嬰幼兒配方食品中克羅諾桿菌屬檢測是非常重要且必不可少的檢測項目。國內外相關(guān)食品安全標準均明確規定嬰幼兒配方食品中不得檢出克羅諾桿菌屬。

為何進(jìn)行黃色素實(shí)驗？

在克羅諾桿菌屬檢測中，黃色素實(shí)驗一直是非常重要的鑒定步驟，后續生化也是在產(chǎn)黃色素的基礎上進(jìn)行的。

黃色素實(shí)驗之所以重要，要從克羅諾桿菌屬的命名史說(shuō)起。1980年之前根據生化反應和產(chǎn)生黃色素等特征該菌被認為是產(chǎn)黃色素的陰溝腸桿菌；1980年命名為阪崎腸桿菌；2008年劃分為獨立的新屬克羅諾桿菌屬。所以，一直以來(lái)黃色素實(shí)驗都作為克羅諾桿菌屬鑒定的重要依據。

黃色素實(shí)驗特殊的培養溫度

GB4789.40-2016《食品安全國家標準??食品微生物學(xué)檢驗克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)?檢驗》中要求，從顯色培養基挑取可疑菌接種TSA平板，25℃±1℃?培養48h±4h。挑取黃色可疑菌落進(jìn)行后續鑒定。

黃色素實(shí)驗的培養溫度有別于其他步驟的培養溫度，因為在25℃±1℃培養條件下更利于黃色素的產(chǎn)生。

下面我們用克羅諾桿菌屬的標準菌株及樣品分離株對培養溫度進(jìn)行驗證。菌株劃線(xiàn)TSA平板分別置于25℃及36℃培養48h，觀(guān)察黃色素產(chǎn)生情況。

實(shí)驗結果如下圖所示：

從實(shí)驗圖片可以得出結論：36℃培養48h菌落生長(cháng)更大，但是多數菌株黃色素的產(chǎn)生比25℃培養48h要差。有些菌株差異不大。因此，進(jìn)行黃色素實(shí)驗時(shí)，TSA平板需要放置于25℃±1℃進(jìn)行培養。

通過(guò)實(shí)驗不僅可以看到不同培養溫度對于黃色素產(chǎn)生的影響；也可以看到即便是25℃進(jìn)行培養，不同菌株產(chǎn)生的黃色素也不完全一致。顏色深淺差異很大，有些菌株甚至基本不產(chǎn)生黃色素。而且國外的研究也發(fā)現, 近 8%的克羅諾桿菌屬不產(chǎn)黃色素。如果只依據黃色素來(lái)決定后續是否進(jìn)行生化鑒定，很容易造成假陰性。

所以，《ISO 22964：2017 Microbiology of the food chain-Horizontal method for the detection of?Cronobacter?spp》標準中，TSA平板上黃色素觀(guān)察不再作為生化鑒定的項目。

綜上所述，在進(jìn)行克羅諾桿菌屬檢測時(shí)，如果顯色培養基上菌落典型，即便TSA上黃色素不明顯也建議進(jìn)行生化鑒定。最終根據生化鑒定結果進(jìn)行綜合判定。

參考文獻

1、GB4789.40-2016食品安全國家標準?食品微生物學(xué)檢驗 克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)?檢驗

2、ISO 22964: 2017 Microbiology of the food chain-Horizontal method for the detection ofCronobacter?spp.

3、萬(wàn)志剛，呂敬章，趙琳娜，等.α-葡萄糖苷酶試驗在克羅諾桿菌鑒定中的應用[J]. 食品安全質(zhì)量檢驗學(xué)報,2009,10(16) :5432~5435

4、Iversen C, Lehner A, Mullane N,?et al. Identification of 'Cronobacter' spp.(Enterobacter sakazakii) [J]. J Clin Microbiol, 2007, 45(11): 3814-381