“牛奶發(fā)酵”是產(chǎn)氣莢膜梭菌的重要生化特征之一。我們在操作時(shí)會(huì )遇到各種問(wèn)題，導致實(shí)驗失敗。下面小編就關(guān)于這項實(shí)驗和小伙伴們簡(jiǎn)單探討一下，希望能為大家解決這一難題。
“牛奶發(fā)酵”實(shí)驗使用含鐵牛奶培養基。
檢驗原理
產(chǎn)氣莢膜梭菌能分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，同時(shí)產(chǎn)生大量氣體，將凝固的酪蛋白沖成蜂窩狀，有時(shí)可將液面向上推擠，甚至會(huì )沖開(kāi)試管帽，稱(chēng)為“暴烈發(fā)酵”。
操作步驟
1
配制
滅菌溫度和時(shí)間嚴格按照標簽要求操作，滅菌后迅速冷卻（宜現用現配）。
2
接種
取生長(cháng)旺盛的新鮮FTG培養液1ml，深入培養基底部進(jìn)行接種。
3
培養
46℃±0.5℃水浴培養，水浴培養時(shí)確保水面高于培養基液面。
4
結果觀(guān)察
46℃±0.5℃水浴培養2 h后，每小時(shí)觀(guān)察一次，觀(guān)察至5h。
5
結果判斷
5h內不發(fā)酵者為陰性，有“暴烈發(fā)酵”現象者為陽(yáng)性。
培養基質(zhì)控
（GB 4789.28-2013）
注意事項
1.?菌株生長(cháng)狀態(tài)
使用生長(cháng)旺盛的新鮮菌，是實(shí)驗成功的關(guān)鍵一步。
FTG培養基培養結果
（左：生長(cháng)良好；右：空白）
2.
硫乙醇酸鹽流體培養基（FTG）的使用
FTG培養基高壓滅菌后若不及時(shí)使用，成分中的刃天青可使氧化層由淺黃色變?yōu)榉奂t色，接種前，觀(guān)察培養基氧化層高度不得超過(guò)培養基深度的1/3，否則，使用前需要脫氧。
FTG脫氧方法：100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過(guò)20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。
3.
滅菌
配制含鐵牛乳培養基時(shí)，我們常遇到一些滅菌鍋滅菌完成后，需要等待一段時(shí)間才能取出培養基，這時(shí)，取出的培養基就已經(jīng)是凝固的狀態(tài)，無(wú)法使用。
針對這種情況，小編采取三種方式配制含鐵牛奶培養基，模擬可能遇到的不同情況，并進(jìn)行了接菌實(shí)驗：
A
●?加熱煮沸至完全溶解，每個(gè)試管分裝10mL培養基，115℃滅菌10min，迅速冷卻后待用。
B
●??加熱煮沸至完全溶解，每個(gè)試管分裝10mL培養基，115℃滅菌10min，自然冷卻后待用。（模擬高壓鍋不能及時(shí)打開(kāi)）
C
●采用煮沸滅菌的方法配置培養基，無(wú)菌操作下，試管分裝10mL培養基待用（試管需提前滅菌）。
三種滅菌效果的空白管：
接菌實(shí)驗結果：
總結
采用煮沸滅菌的培養基和嚴格按照標簽滅菌并迅速冷卻的培養基可獲得正確的實(shí)驗結果，若使用已經(jīng)凝固的培養基進(jìn)行暴烈發(fā)酵實(shí)驗，可能導致結果異常。
4.
儲存
建議儲存條件為陰涼干燥處，開(kāi)封后盡量做好密封。在配制培養基時(shí)，可以先聞一下培養基的氣味，應是脫脂奶粉的香氣，如有異味，培養基可能已發(fā)生變質(zhì)，不建議使用。
參考文獻
1、GB 4789.13-2012食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗
2、GB 8538-2016 食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法
3、《中華人民共和國藥典》2020版
陸橋官方公眾號