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    沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解（一）

    發(fā)布時(shí)間： 2021-12-02

    年終歲末，重磅福利！

    多少個(gè)日夜，我們被沙門(mén)檢驗的復雜流程搞的頭暈腦脹！

    多少次回首，我們被沙門(mén)檢驗的干擾菌株搞的身心俱疲！

    不要彷徨，不要迷茫。

    陸橋技術(shù)部為微生物檢驗員傾力打造《沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解》系列文章。

    通過(guò)原理幫您照亮檢驗流程中隱秘的角落。

    通過(guò)近50張照片幫您突破沙門(mén)干擾菌造就的重重迷霧。

    從此天塹變通途。

    由于文章內容過(guò)于豐富，篇幅過(guò)長(cháng)，故分四期給大家呈現。

    本期主要帶大家認識沙門(mén)，并揭示增菌的秘密。

    '01

    沙門(mén)氏菌簡(jiǎn)介

    沙門(mén)氏菌屬（Salmonella）是一群寄生在人類(lèi)和動(dòng)物腸道中，生化反應和抗原結構相關(guān)的革蘭氏陰性桿菌。沙門(mén)氏菌屬細菌的血清型現已達2500多種。根據DNA同源性，分兩個(gè)種，即腸道沙門(mén)氏菌（S.enterica）和邦戈沙門(mén)氏菌（S.bongori）。腸道沙門(mén)氏菌又分6個(gè)亞種，能感染人類(lèi)的沙門(mén)氏菌血清型，約1400多種，主要在第一亞種中，即腸道沙門(mén)氏菌腸道亞種（S. enterica subsp. Enterica）。


    沙門(mén)氏菌屬中少數血清型如傷寒沙門(mén)氏菌、甲型副傷寒沙門(mén)氏菌、乙型副傷寒沙門(mén)氏菌和丙型副傷寒沙門(mén)氏菌是人的病原菌，對人類(lèi)有直接的致病作用，引起腸熱癥，對非人類(lèi)宿主不致病。絕大多數血清型宿主范圍廣泛，家畜、家禽、野生脊椎動(dòng)物以及冷血動(dòng)物、軟體動(dòng)物、環(huán)形動(dòng)物、節肢動(dòng)物（包括蒼蠅）等均可帶菌，其中部分沙門(mén)氏菌是人獸共患病的病原菌，可引起人類(lèi)食物中毒或敗血癥。



    '02

    沙門(mén)氏菌的生物學(xué)特性



    2.1 形態(tài)與染色



    革蘭氏陰性桿菌，大?。?.6-1.0）μm×（2-4）μm。有菌毛。除雞沙門(mén)氏菌和雛鴨沙門(mén)氏菌等個(gè)例外，都有周身鞭毛。一般無(wú)莢膜，均無(wú)芽孢。


    沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解（一）



    2.2 生化反應與培養特性



    兼性厭氧菌，營(yíng)養要求不高，在普通瓊脂平板上可生長(cháng)。不發(fā)酵乳糖或蔗糖，能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖和甘露糖。除傷寒沙門(mén)氏菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣外，其他沙門(mén)氏菌均產(chǎn)酸產(chǎn)氣。


    2.3 抵抗力




    沙門(mén)氏菌對理化因素的抵抗力較差，濕熱65℃、15-30min即被殺死。對一般消毒劑敏感，但對某些化學(xué)物質(zhì)如膽鹽、煌綠等的耐受性較其他腸道菌強，故用作沙門(mén)氏菌選擇培養基的成分。本菌在水中能存活2-3周，糞便中可存活1-2個(gè)月，在冰中能存活更長(cháng)時(shí)間。



    '03

    沙門(mén)氏菌檢驗流程

    （GB 4789.4-2016）


    所有定性檢驗的流程都是層層篩選的，每層都排除一些非目標菌，這樣最后得到的就是我們要檢的目標菌。在方法建立的時(shí)候，每一步試驗都是經(jīng)過(guò)驗證的，所以檢驗過(guò)程中不能跳步。沙門(mén)氏菌檢驗是所有定性檢驗項目中步驟最全的，包括樣品處理、預增菌、選擇性增菌、選擇性分離、純化、生化鑒定和血清學(xué)鑒定。比如我們就不能越過(guò)生化鑒定，直接做血清學(xué)鑒定，那樣會(huì )很容易出假陽(yáng)性?，F在我們就從第一步開(kāi)始給大家介紹一下沙門(mén)氏菌的檢驗。


    沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解（一）


    3.1 樣品處理及預增菌



    無(wú)菌操作稱(chēng)取25g（mL）樣品，置于盛有225mL緩沖蛋白胨水（BPW）的無(wú)菌均質(zhì)杯、均質(zhì)袋或合適容器內，根據標準要求進(jìn)行均質(zhì)。若樣品為液體，即可以均質(zhì)，也可以震蕩混勻。于36℃±1℃培養8h-18h。


    樣品處理時(shí)注意避免樣品間交叉污染；均質(zhì)袋與均質(zhì)器的組合是目前常用的均質(zhì)方式；BPW的預增菌對沙門(mén)氏菌檢驗尤其重要，因為食品加工中采用的各種工藝（冷凍、加熱、干燥、高鹽等）使得菌體細胞不同程度地受損，受損的菌株會(huì )漏檢，在食品存放過(guò)程中自我修復后能引起人的疾病。BPW為非選擇性的增菌培養基，培養過(guò)程中緩沖體系能將培養基維持在較高pH，有利于受損細胞的恢復。BPW具體原理請參考陸橋官網(wǎng)緩沖蛋白胨水（BPW）。

    沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解（一）沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解（一）


    3.2 選擇性增菌



    將培養后BPW搖勻，取1mL轉種于10mL 四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB），于42℃±1℃培養18h-24h，同時(shí)再取1mL轉種于亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC），于36℃±1℃培養18h-24h。


    TTB增菌液的配制有兩個(gè)注意事項，一是碳酸鈣是TTB的正常成分，作用是中和吸收有毒性的代謝物質(zhì)（主要是培養基酸堿度的變化對菌生長(cháng)的影響）。但是碳酸鈣不溶于水，所以TTB有沉淀是正常的，分裝時(shí)一定搖勻分裝。二是四硫磺酸鈉是TTB抑制性的核心成分，培養基也以此命名，但成分表中并沒(méi)有四硫磺酸鈉，它是在碘液煌綠加入后，硫代硫酸鈉經(jīng)碘氧化生成的。四硫磺酸鈉對大腸菌群有抑制作用，但不穩定，所以碘液和煌綠必須在臨用前加入。具體原理可以參考陸橋官網(wǎng)四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）。


    沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解（一）



    SC增菌液配置時(shí)若過(guò)度加熱，或存放時(shí)氧化吸潮，則溶液易出現磚紅色沉淀，此時(shí)培養基不能使用。原因是亞硒酸鹽被氧化失效，選擇性下降。若SC增菌液接種時(shí)為淡黃色溶液，培養后呈磚紅色，這屬于正?，F象，說(shuō)明增菌液中有細菌大量增殖。具體原理可以參考陸橋官網(wǎng)亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）。

    沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解（一）



    為什么TTB和SC要求同時(shí)使用呢？


    根據資料顯示，傷寒沙門(mén)氏菌不能在TTB上生長(cháng)，可以在SC上正常生長(cháng)，所以?xún)煞N培養基具有一定互補性。我們將幾種常見(jiàn)沙門(mén)氏菌標準菌（傷寒、鼠傷寒、腸炎沙門(mén)等）分別微量接種TTB和SC，發(fā)現只有傷寒沙門(mén)氏菌在TTB上基本澄清，而SC上明顯渾濁，與資料描述基本一致。傷寒沙門(mén)氏菌只是我們發(fā)現的其中一種，由于沙門(mén)氏菌的種類(lèi)繁多，為了避免漏檢，兩種培養基一定要同時(shí)使用。

    沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解（一）























    沙門(mén)氏菌檢驗流程詳解（一）


    好了，今天的介紹就這些。下期給大家帶來(lái)BS瓊脂和XLD瓊脂。


    敬請期待。。。。




    To be continued
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