? ? ? ?感謝各位老師參與11月17日的陸橋公益直播課《2022版國標食品中葉酸和維生素B12微孔板法測定解析》，如您未能及時(shí)聆聽(tīng)，我們已設置回放，有效期一周（至2022年11月27日） 。
? ? ? ?期待您再次參與陸橋的直播課。
直播課問(wèn)題解答
1.?葉酸標準曲線(xiàn)制作幾平行？
根據2022版國標最新要求，葉酸是2-3平行，維生素B12是3平行。
2.?標準系列管怎么混勻？
標準系列管各組成溶液添加完畢后，用渦旋振蕩器混勻。
3.?試管法有試劑盒嗎？
有試管即用型試劑盒，分別是葉酸(GVT1001)、維生素B12(GVT1002)、生物素(GVT1003)和泛酸(GVT1004)。
4.?容量瓶需要定期檢定嗎？
需要，GB/T 27405-2008《實(shí)驗室質(zhì)量控制規范?食品微生物檢測》標準中明確規定需要對定容設備定期檢查以確保其準確度。
5.?有時(shí)強化食品生產(chǎn)企業(yè)會(huì )在標注量上故意多添加一些，這種情況下該如何估算？
第一次做此類(lèi)樣品只能預估含量，適當多選幾個(gè)稀釋倍數。后續有經(jīng)驗了，可根據經(jīng)驗預估含量。
6.?標準系列管最后高濃度的幾個(gè)點(diǎn)不穩定有什么可能的原因？
原因較多，可以重點(diǎn)看標品配制的準確性和添加的準確性，特別是移液槍的準確度。
7.?請問(wèn)您用試管的多管法紫外分光光度計測定標準曲線(xiàn)選幾次曲線(xiàn)？國標里面沒(méi)有明確規定，也沒(méi)有對線(xiàn)性做明確要求。
國標對標準曲線(xiàn)的擬合方式?jīng)]有明確要求，實(shí)驗室內部統一即可。我們一般用二次多項式曲線(xiàn)擬合。
8.?國標法葉酸培養基滅菌以多少毫升為宜？以前做過(guò)會(huì )發(fā)生褐變。
培養基用量根據實(shí)驗樣品數量來(lái)定，一般滅菌后要及時(shí)從高壓鍋中取出，立刻降溫，避免過(guò)度加熱。
9.?按含量選擇稀釋倍數但是還是超標曲，為什么呢？
一般是因為樣品的實(shí)際含量高于樣品標簽值，建議按經(jīng)驗含量值預估稀釋倍數。
10.?玻璃器具浸泡可以只用洗滌劑浸泡嗎，需要浸泡多久？
2022版國標上明確寫(xiě)可以用鹽酸或月桂基磺酸鈉洗滌劑浸泡，但未明確浸泡時(shí)間。2014版國標上要求鹽酸浸泡2小時(shí)。我們目前還是浸泡2小時(shí)。
11.?鹽酸浸泡，鹽酸濃度有要求不？
國標上試劑配制里有寫(xiě)，例如葉酸在國標3.2.5條款中要求“量取100mL鹽酸（濃度36%-38%）與50倍水混合”。
12.?培養基用什么盛裝滅菌？如何混勻？
用三角瓶就可以，滅菌前通過(guò)玻璃棒攪拌或浸泡方式充分溶解。
13.?曲線(xiàn)達到多少算合格呢？
國標上沒(méi)有明確要求。我們自己一般用二次多項式曲線(xiàn)擬合，R2值一般0.99常見(jiàn)，最低要求0.97。
14.?酶解法，如何進(jìn)行預估比較合理？
酶解法處理的是原生樣品，可查閱相關(guān)資料獲取含量范圍或通過(guò)預實(shí)驗先摸索含量。
15.?標準曲線(xiàn)需要0.999嗎？
維生素實(shí)驗3個(gè)9很難實(shí)現。我們自己一般用二次多項式曲線(xiàn)擬合，R2值一般0.99常見(jiàn)，最低要求0.97。
16.?維生素B12國標方法計算公式能麻煩講解一下么？
維生素B12國標計算公式中只有一個(gè)f，沒(méi)有像葉酸一樣寫(xiě)明是V×f，所以維生素B12的f實(shí)際就是V和f的乘積結果。
17.?5mL不含葉酸的標準工作液是什么？
應該是5mL不加葉酸標準工作液的無(wú)菌葉酸測定培養基，其實(shí)就是葉酸測定培養基。
18.?曲線(xiàn)為什么會(huì )飄點(diǎn)呢？
要結合具體數據才能分析，一般來(lái)說(shuō)與標品配制的溶解和添加準確性有關(guān)系。
19.?維生素B12過(guò)濾的樣品用都過(guò)濾完嗎？
不需要，只要過(guò)濾出需要的量就可以了。
20.?微孔法數據處理是我們蝴蝶軟件嗎？怎么用的呢？
Excel和蝴蝶軟件都可以，蝴蝶軟件用法不變，只有稀釋度那里需要根據實(shí)際稀釋倍數進(jìn)行調整換算。
21.?更新版的陸橋維生素B12培養基顏色方面有改進(jìn)嗎？
2022版國標對培養基成分沒(méi)有調整，所以我們培養基配方不會(huì )改變，還是與國標保持一致。
22.?葉酸計算公式C0?是接種空白嗎？一定要扣除零點(diǎn)嗎？國標里的公式?jīng)]有明確標注要扣零點(diǎn)。
C0?是酶解法公式中的參數，是酶空白測定的值。一般常用的直接提取法是不會(huì )用到這個(gè)參數的。
23.?萊士曼氏乳桿菌不太穩定，有什么好的保存方法？
我們實(shí)驗室菌株長(cháng)期保藏用-80度甘油法，一個(gè)月內保藏放2-8℃冰箱，葉酸和生物素的菌株可以平板直接放入冰箱，維生素B12?的萊士曼乳桿菌需穿刺培養后，放入冰箱。
24.?同樣的培養基，同樣的菌株活化方法，維生素B12國標法長(cháng)但微孔板不長(cháng)是什么原因呢？
微孔板法的培養體系是300μl，遠小于試管法的10mL。所以對標準品的混勻程度，菌活力、濃度及菌的混勻程度，各級溶液的混勻，移液槍的準確度都有更高的要求。建議從這些方面排查原因。
25.?新版維生素B12國標方法的計算公式單位最后怎么換算成μg/100g？
公式中有換算系數，按公式計算后單位即為μg/100g。
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（回放截止到2022年11月27日）
