惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌。有些菌株為卵圓形，單端叢毛菌，運動(dòng)活潑。惡臭假單胞為專(zhuān)性需氧菌，廣泛存在于土壤和水中。

在GB 8538-2022《食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法》銅綠假單胞檢測項目中，要求定期使用惡臭假單胞菌作為陰性對照菌對整個(gè)檢驗過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制。

今天我們就通過(guò)實(shí)驗詳細介紹一下惡臭假單胞的菌株活化及生化特性等。

一、惡臭假單胞菌菌株活化

菌株活化一定要選擇合適的培養條件才能夠保證微生物的生長(cháng)?！恫芗毦b定手冊》中表明惡臭假單胞菌最適生長(cháng)溫度為25℃-30℃。ATCC（美國菌種保藏中心）給出的菌株活化說(shuō)明中，培養溫度為30℃；CICC（中國工業(yè)微生物菌種保藏中心）菌種說(shuō)明中要求培養溫度為28℃。

我們將菌株接種到營(yíng)養瓊脂平板和BHI（腦心浸液培養基）中分別置于36℃和28℃培養箱中培養24h。經(jīng)實(shí)驗發(fā)現，惡臭假單胞菌在36℃也可以生長(cháng)，但比28℃生長(cháng)弱一些。所以在菌株活化時(shí)，為保證菌株良好生長(cháng)建議25℃-30℃進(jìn)行培養。

二、惡臭假單胞菌的生物學(xué)特性

在GB 8538-2022《食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法》銅綠假單胞檢測項目中，惡臭假單胞菌為陰性對照菌，銅綠假單胞菌為陽(yáng)性對照菌。那么惡臭假單胞菌生物學(xué)特性是什么？與銅綠假單胞菌又有何區別？我們通過(guò)實(shí)驗現象來(lái)進(jìn)行了解。

1）假單胞CN瓊脂

將活化好的菌株接種假單胞CN瓊脂，36℃培養24h。平板上銅綠假單胞為藍綠色菌落，而惡臭假單胞為無(wú)色菌落。將平板置于366nm紫外燈下觀(guān)察熒光，銅綠假單胞有熒光，惡臭假單胞無(wú)明顯熒光。

2）綠膿菌素測試

將菌株接種到綠膿菌素測定培養基上，３６℃±１℃培養２４ｈ±２ｈ，加入三氯甲烷３ｍＬ～５ｍＬ，可搗碎培養基并充分振蕩使培養物中的綠膿菌素溶解于三氯甲烷，待三氯甲烷提取液呈藍色時(shí)，用吸管將三氯甲烷移到另一試管中，并加入１mol／Ｌ的鹽酸１ｍＬ，振蕩后，靜置片刻。如上層鹽酸液內出現粉紅色到紫紅色時(shí)為陽(yáng)性。

銅綠假單胞菌綠膿菌素實(shí)驗為陽(yáng)性，惡臭假單胞菌為陰性。

3）產(chǎn)胺實(shí)驗

將菌株接種至乙酰胺液體培養基中，在３６℃±１℃下培養２０ｈ～２４ｈ。然后向每支試管培養物加入１滴～２滴鈉氏試劑，１0ｓ內檢查各試管的顏色變化，如表現出從黃色到磚紅色的顏色變化，則為陽(yáng)性結果，否則為陰性。

銅綠假單胞菌產(chǎn)胺實(shí)驗為陽(yáng)性，惡臭假單胞菌為陰性。

4）42℃生長(cháng)實(shí)驗

將菌株接種營(yíng)養瓊脂平板上或者42℃生長(cháng)試驗生化管中，４２℃±１℃ 培養２４ｈ～４８ｈ，能生長(cháng)為陽(yáng)性結果，否則為陰性。

銅綠假單胞菌42℃生長(cháng)實(shí)驗為陽(yáng)性，惡臭假單胞為陰性。

5）氧化酶實(shí)驗

?。驳巍车涡迈r配制的氧化酶試劑滴到放于平皿里的潔凈濾紙上。?將菌株純培養物涂布在預備好的濾紙上。在１０ｓ內顯深藍紫色的視為陽(yáng)性反應。?

銅綠假單胞菌和惡臭假單胞菌氧化酶實(shí)驗均為陽(yáng)性。

6）金氏B培養基產(chǎn)熒光實(shí)驗

將菌株接種于金氏Ｂ培養基３６℃±１℃恒溫箱培養１ｄ～５ｄ。每天需取出在紫外燈下檢查其是否產(chǎn)生熒光，將５ｄ內產(chǎn)生熒光的菌落記錄為陽(yáng)性。

銅綠假單胞菌產(chǎn)生熒光為陽(yáng)性，惡臭假單胞菌不產(chǎn)熒光為陰性。

綜合以上實(shí)驗結果，銅綠假單胞菌和惡臭假單胞菌在培養基上的菌落形態(tài)以及主要生化反應結果匯總如下：

參考文獻：

1、GB 8538-2022《食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法》

2、《伯杰細菌鑒定手冊》【M】，科學(xué)出版社，布坎南（R.E.Buchanan）等編，1984

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